КЛЕТКИ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ. OMICS ТЕХНОЛОГИИ
Гейтирование
Гейтирование (flow cytometry gating) - последовательная сортировка и анализ данных в многоцветной проточной цитометрии на основе выделения интересующих популяций клеток. Обычно первоначально производится гейтирование по CD45 - общему маркёру лейкоцитов, затем выделяются все лимфоциты на основе прямого и бокового светорассеяния. В последующем после двойного гейтирования по CD45 и лимфоцитарному региону проводится определение процентного содержания субпопуляций лимфоцитов, меченных разными флюорохромами для выявления отдельных интересующих маркеров клеток.
Фенотип и секреторная активность разных Т-клеток в ходе Т-клеточных иммунных ответов меняется в зависимости от стадии дифференцировки: наивные (включая недавних тимусных эмигрантов - RTE), активированные, эффекторные и клетки памяти. Эффекторные Т-лимфоциты считаются конечной стадией дифференцировки Т-клеток.
Классически для гейтирования могут использоваться следующие маркёры:
CD45 - общий маркёр лейкоцитов,
CD27 - клеточная адгезивная молекула из суперсемейства рецепторов TNF, ответственная за выживание активированных Т-клеток или их апоптоз,
CD28 - костимуляторная молекула,
CD62L - клеточная адгезивная молекула-селектин, ответственная за 1-ю фазу трансмиграции лейкоцитов через стенку сосуда,
CCR7 - хемокин, ответственный за миграцию клеток в лимфоидные органы (лимфатические узлы, селезёнку, МАЛТ) и
цитокины, секретируемые клетками.
Критерий
Наивные Т-клетки
Эффекторные Т-клетки
Центральные Т-клетки памяти
Эффекторные Т-клетки памяти
CD45 (маркёр лейкоцитов и их зрелости с учётом изоформ)
CD45RA+, CD45RO-
CD45RA+, CD45RO-
CD45RA-, CD45RO+
CD45RA-, CD45RO+
CD27 (защита от апоптоза), CD28 (костимуляция)
CD27+, CD28+
CD27-, CD28-
CD27+, CD28+
CD27+, CD28+ (есть другие варианты экспрессии)
CD62L (экстравазация)
CD62L+
CD62L-
CD62L+
CD62L-
CCR7 (хоминг в лимфоидные органы)
CCR7+
CCR7+
CCR7+
CCR7-
Цитокины (регуляторные или эффекторные)
IL-2
IFN-γ, TNF-β
IL-2
IFN-γ, TNF-β
Данные, получаемые разными исследователями, иногда отличаются. Также следует отметить, что постепенно накапливается новые данные по гетерогенности Т-клеток на разных стадиях зрелости.
Автор выражает благодарность за информацию, которая частично использована на данной странице, полученную в ходе вебинара 7 декабря 2021 г. (ФГБНУ "Институт экспериментальной медицины", отдел иммунологии, Санкт-Петербург; 1-й Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И.П.Павлова, кафедра иммунологии).©В.В.Климов