КЛЕТКИ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ. OMICS ТЕХНОЛОГИИ

Гейтирование

Гейтирование (flow cytometry gating) - последовательная сортировка и анализ данных в многоцветной проточной цитометрии на основе выделения интересующих популяций клеток. Обычно первоначально производится гейтирование по CD45 - общему маркёру лейкоцитов, затем выделяются все лимфоциты на основе прямого и бокового светорассеяния. В последующем после двойного гейтирования по CD45 и лимфоцитарному региону проводится определение процентного содержания субпопуляций лимфоцитов, меченных разными флюорохромами для выявления отдельных интересующих маркеров клеток.
Фенотип и секреторная активность разных Т-клеток в ходе Т-клеточных иммунных ответов меняется в зависимости от стадии дифференцировки: наивные (включая недавних тимусных эмигрантов - RTE), активированные, эффекторные и клетки памяти. Эффекторные Т-лимфоциты считаются конечной стадией дифференцировки Т-клеток.
Классически для гейтирования могут использоваться следующие маркёры:
CD45 - общий маркёр лейкоцитов,
CD27 - клеточная адгезивная молекула из суперсемейства рецепторов TNF, ответственная за выживание активированных Т-клеток или их апоптоз,
CD28 - костимуляторная молекула,
CD62L - клеточная адгезивная молекула-селектин, ответственная за 1-ю фазу трансмиграции лейкоцитов через стенку сосуда,
CCR7 - хемокин, ответственный за миграцию клеток в лимфоидные органы (лимфатические узлы, селезёнку, МАЛТ) и
цитокины, секретируемые клетками.

Критерий

Наивные Т-клетки

Эффекторные Т-клетки

Центральные Т-клетки памяти

Эффекторные Т-клетки памяти

 CD45 (маркёр лейкоцитов  и их зрелости с учётом  изоформ)

 CD45RA+,  CD45RO-

 CD45RA+,  CD45RO-

 CD45RA-,  CD45RO+

 CD45RA-,  CD45RO+

 CD27 (защита от  апоптоза), CD28  (костимуляция)

 CD27+, CD28+

 CD27-, CD28-

 CD27+, CD28+

 CD27+, CD28+  (есть другие  варианты  экспрессии)

 CD62L (экстравазация)

 CD62L+

 CD62L-

 CD62L+

 CD62L-

 CCR7 (хоминг в  лимфоидные органы)

 CCR7+

 CCR7+

 CCR7+

 CCR7-

 Цитокины (регуляторные  или эффекторные)

 IL-2

 IFN-γ, TNF-β

 IL-2

 IFN-γ, TNF-β

Данные, получаемые разными исследователями, иногда отличаются. Также следует отметить, что постепенно накапливается новая информация по гетерогенности Т-клеток на разных стадиях зрелости.

©В.В.Климов