ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ Иммуноблот (Вестерн-блот) Иммуноблот (Вестерн-блот) применяется для идентификации конкретного антигена в смеси разных антигенов (например, ВИЧ). Первоначально смесь белков (антигенов) разделяется в полиакриламидном геле, затем белки с гелем электрофоретически переносятся на нитроцеллюлозную мембрану. В электрическом поле эти белки, покрытые отрицательно заряженным натрия додецил сульфатом (SDS), мигрируют к положительному электроду, на котором находится нитроцеллюлозная мембрана. Нитроцеллюлоза связывает любой белок, с которым она приходит в соприкосновение, поэтому она захватывает все мигрирующие белки. Они оказываются на мембране в том же месте, в котором были в геле. Таким образом, мембрана является "блотом" геля. Гель удаляется, а мембрана покрывается инертным белком (например, сывороточным альбумином) для устранения возможности попадания других белков. Затем добавляются первичные антитела, специфичные к идентифицируемому антигену, которые за счёт альбуминовой плёнки непосредственно не прикасаются к мембране. После отмывания на мембране остаются только первичные антитела, связанные с конкретным антигеном. Для визуализации используется дополнительная метка вторичными антителами, специфичными к Fc-фрагменту первичных антител. Вторичные антитела связаны с энзимом, а при добавлении хромогенного субстрата в месте локализации идентифицируемого антигена и первичных антител на мембране выпадают преципитаты цветного окрашивания.