МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

Полимеразная цепная реакция



Принцип прямой полимеразной цепной реакции (ПЦР) заключается в многократном копировании исследуемой ДНК. В качестве диагностических наборов используются олигонуклеотидные затравки - праймеры, последовательность которых имеет известную специфичность и комплементарна фрагментам этой ДНК. Реакция протекает в программируемом термостате (амплификаторе), где термостабильная ДНК-полимераза катализирует процесс синтеза (амплификации) большого числа точных копий исследуемой ДНК. В последующем эти копии (ампликоны) для их идентификации могут быть помечены комплексом биотин-авидин-энзим, что при добавлении субстрата с хромогеном, позволяет получить цветную реакцию.
При обратной ПЦР первоначально выделяется мРНК, на основе которой с помощью обратной транскриптазы производится синтез ДНК. Этот метод удобен для исследования различных молекул иммунной системы, которые синтезируются в организме.

©В.В.Климов