Принцип прямой полимеразной цепной реакции
(ПЦР) заключается в многократном копировании исследуемой ДНК.
В качестве диагностических наборов используются олигонуклеотидные
затравки - праймеры, последовательность которых имеет известную
специфичность и комплементарна фрагментам этой ДНК. Реакция протекает
в программируемом термостате (амплификаторе), где термостабильная ДНК-полимераза
катализирует процесс синтеза (амплификации) большого числа точных копий исследуемой ДНК.
В последующем эти копии (ампликоны) для их идентификации могут быть помечены комплексом
биотин-авидин-энзим, что при добавлении субстрата с хромогеном, позволяет получить
цветную реакцию.
При обратной ПЦР первоначально выделяется мРНК, на основе
которой с помощью обратной транскриптазы производится синтез ДНК. Этот метод удобен
для исследования различных молекул иммунной системы, которые синтезируются в организме.
©В.В.Климов
|