ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ Реакция бласттрансформации лимфоцитов Этот классический метод (lymphoblast transformation test - LTT) основан на способности сенсибилизированных лимфоцитов вступать в митозы с образованием лимфобластов под влиянием соответствующего антигена или неспецифических митогенов in vitro. Фактически данный метод позволяет оценивать клональную экспансию клеток, а также может использоваться для установления сенсибилизации при типе IV гиперчувствительности. Митогены - это вещества, способные индуцировать митозы. Имеется несколько митогенов для лимфоцитов: липополисахариды (lipopolysaccharides) грамотрицательных бактерий - для В-клеток, митоген лаконоса (pokeweed mitogen - PWM) - для Т- и В-клеток, фитогемагглютинин (phytohaemagglutinin - PHA) и конканаваллин А (concanavallin A - ConA) - для Т-клеток. Для проведения исследования требуются ламинарный бокс и сцинтиляционный спектрофотометр. Разведённая гепаринизированная кровь помещается в специальную среду (например, фиколл-пак) с градиентом плотности 1,077 для разделения клеток на слои при центрифугировании. В результате образуются различные фракции: супернатант, лимфоциты + моноциты, среда, эритроциты + гранулоциты. Лимфоциты отделяются от моноцитов за счёт способности последних к адгезии, помещаются в специальную культуральную среду с антигеном или митогеном и инкубируются в течение 4-5 дней при 37°C. Подсчёт лимфобластов производится по включению 3H-тимидина с помощью жидкого сцинтиляционного спектрофотометра или под микроскопом. ©В.В.Климов